Protocolo de Diagnóstico, Tratamiento y Seguimiento de Leucemia Mieloide Aguda del Adulto

SOLCA - LMA

¿La cura de la Leucemia?

El caso de la fémina de 50 años de edad, viene a dar respuesta a las suposiciones que muchos médicos a escala mundial, venían realizando sobre el antídoto para atacar la enfermedad que sigue afectando a miles de personas en el mundo.

Un grupo de médicos estadounidenses logró sanar a una paciente que padecía leucemia inyectándole una vacuna contra el sarampión.

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Distintas formas de curar

La sanación no solo significa que dejará de padecer la enfermedad, sino también que puede sobrellevarla de mejor manera.

Miles Scott está enfermo desde los 18 meses. Las autoridades, sus vecinos de San Francisco y hasta Obama se complotaron para cumplirle el sueño: liberar a la ciudad de los malvados disfrazado de Batman

Batkid
with Batman
Life is a movie


Fuente de la noticia

Joven inventa detector de leucemia

Su trabajo se basa en redes neuronales artificiales, que son programas de computación codificados para “pensar” igual que un cerebro. Se trata de un sistema de interconexión de neuronas que colaboran entre sí para producir un estímulo de salida.

Noticia

Terapia génica o celular y LMA

Objetivos de la Terapia Génica

•     Incrementar la respuesta inmune celular contra el tumor.
•     Introducir un gen activador de la droga dentro del tumor.
•     Normalizar el ciclo celular inhibiendo oncogenes o transfiriendo genes supresores de tumores

Las ribozimas son moléculas de RNA catalíticas que actúan específicamente sobre los genes proliferativos de las células, los oncogenes ras, bcr-abl, c-fos.

      El empleo de oligodeoxinucleótidos antisentido (ASODNs) complementarios a los oncogenes inhiben la expresión de las oncoproteínas (Forman parte de la carga genética de las células normales y codifican para la síntesis de moléculas polipeptídicas, muchas de las cuales se comportan como factores de crecimiento, o sea, que determinan un estado mitogénico) 

Experimento realizado a principios del 2002

Ratones transgénicos

Gen marcador, en principio inerte, para marcar células de médula ósea de ratón.

Transplante en animales irradiados

Células primarias transplantadas a células secundarias desarrollaron leucemia mieloide aguda.

La integración del provirus activó el gen celular Evi1, que codifica un factor de transcripción que, en cooperación con el producto del transgén, contribuyó a la aparición de este tipo de leucemia.

Bibliografía: 

http://www2.cbm.uam.es/atalavera/NevosSistemas.pdf

http://www.bvs.sld.cu/revistas/onc/vol15_2_99/onc09299.htm 

http://www.buenastareas.com/ensayos/Conceptos-B%C3%A1sicos-De-Oncogenesis-Viral/232631.html

Transgénicos y LMA

• La leucemia se desarrolla en ratones transgénicos que expresan LPM-RAR-alfa después de un periodo de latencia de hasta 1 año. Con esto sólo se observa una modesta expansión del compartimiento mieloide, y los promielocitos LPM-RAR-alfa tienen perfiles de expresión génica que son casi idénticos a los promielocitos normales. También otras lesiones, todavía desconocidas, colaboran con LPM-RAR-alfa para bloquear la diferenciación y estimular la acumulación de los promielocitos malignos y su auto renovación.

• La aplicación de ácido trans-retinoico a LPA en células de cultivo que expresan la proteína de fusión LPM-RAR-alfa, y a LPM-RAR-alfa en ratones transgénicos provoca la diferenciación de los promielocitos malignos en los granulocitos maduros. 

• Las drogas tienen un efecto adicional: reducen el número de células capaces de regenerar leucemia

Bilbiografía:
http://www.saval.cl/cienciaymedicina/progresosmedicos/14989.html

Ejemplo de ADN recombinante artificial en la LMA

Gemtuzumab ozogamicin

Es un anticuerpo monoclonal conjugado a un agente antitumoral. El anticuerpo reconoce el CD33, la cual es una proteína que se expresa en la superficie celular de las células mieloides primitivas (blastos), donde se inicia la LMA. Estáconjugada a la caliqueamicina, la cual es un potente antibiótico antitumoral que ingresa al núcleo y rompe secuencias específicas del ADN. 

La FDA (Food and Droug Administration) ha aprobado esta medicación para el uso en LMA, en pacientes de 60 años o más que expresen CD33, después de una primera recaída y que no son candidatos para quimioterapia citotóxica. La toxicidad más importante es la hematológica, caracterizada por mielosupresión con neutropenia febril, sin embargo, se han reportado además, un síndrome veno-oclusivo hepático o sinusoidal obstructivo, el cual puede comprometer la vida del paciente.

Bibliografía:

http://www.fihu-diagnostico.org.pe/revista/numeros/2010/oct-dic/159-165.html

http://www.nature.com/onc/journal/v26/n25/images/1210364f1.jpg

http://usermeds.com/static/a155117b4b69d8801ad8e7a379b6b349.gif

ADN recombinante en la naturaleza

¿Qué es el ADN Recombinante?

Se define como ADN recombinante a la unión de dos o más fragmentos unidos de una molécula de ADN o a la información genética de 2 genotipos que puede ser agrupada en uno nuevo. 

ADN recombinante en la naturaleza

La recombinación de eucariotas comúnmente se produce durante la meiosis como entrecruzamiento cromosómico entre los cromosomas apareados. Este proceso conduce a que la progenie tenga diferentes combinaciones de genes de sus padres y pueda producir alelos quiméricos.

La recombinación en procariotas, específicamente en bacterias tiene lugar cuando se transfieren fragmentos de DNA homólogo desde una célula donadora a una célula receptora mediante cualquiera de estos tres procesos:

• Transformación: el ADN se encuentra libre en el medio

• Transducción: La transferencia del ADN donador está mediada por un virus

• Conjugación: La transferencia implica un contacto célula-célula y la presencia de un plásmido conjugativo en la célula donadora.

Ejemplo de ADN Recombinante en la naturaleza

Para la clonación se requiere introducir el ADN recombinante en una célula anfitriona, como podría ser, en los eucariotas, las levaduras. Estas se utilizan en procesos relacionados con la investigación de la expresión, la regulación génica y la síntesis de proteínas eucariotas.

Levaduras en la Fermentación del Vino
La levadura se denomina como cualquiera de los diversos hongos microscópicos unicelulares que son importantes por su capacidad para realizar la descomposición mediante fermentación de diversos cuerpos orgánicos, como son los hidratos de carbono, produciendo distintas sustancias. Estas transforman el azúcar en alcohol y CO2 y como estos son tóxicos para ellas, lo expulsan junto a otros productos.

Bibliografía:
http://comoserecombinaeladnenlanaturaleza.blogspot.com/
http://darwin.usal.es/profesores/pfmg/sefin/MI/tema10MI.html
http://www.itescam.edu.mx/principal/sylabus/fpdb/recursos/r73852.PDF
http://urbinavinos.blogspot.com/2012/07/comercializacion-una-levadura-autoctona.html
http://recursostic.educacion.es/ciencias/biosfera/web/alumno/2bachillerato/biotec/contenidos3.htm
http://es.scribd.com/doc/70708591/Recombinacion-geneticahttp://personales.ya.com/geopal/biologia_2b/unidades/ejercicios/act14bactema7.htm
http://ligamiento-genetico-com.webnode.com.ve/entrecruzamiento/dos-y-tres-puntos/
http://campus.com.sv/user_content/photos/000/005/5190/6643a3aa0844ec3b71df45e920cc3748-original-vino-tinto.jpg

Otros tipos de Pruebas Moleculares para LMA

• Recuento sanguíneo completo y frotis de sangre periférica
• Exámenes microscópicos rutinarios
• Química sanguínea y pruebas de coagulación

• Citoquímica

• Citometría de flujo e inmunohistoquímica

Sirve para analizar las células de las muestras de médula ósea y sangre. Es muy útil para determinar el tipo exacto de leucemia.

Estas pruebas se usan para determinar el inmunofenotipo de las células.

• Citogenética

Se puede observar traslocación, inversión, supresión y/o adición.

• Hibridización in situ con fluorescencia (FISH)

La prueba FISH se puede usar para detectar cambios específicos en los cromosomas. Se puede usar en muestras regulares de sangre y médula ósea. Es muy precisa y se obtienen los resultados en un par de días.

Bibliografía:
http://www.cancer.org/espanol/cancer/leucemiamieloidenaaguda/guiadetallada/leucemia-mieloide-mielogena-aguda-early-diagnosed
http://www.scielo.cl/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0716-98681998000200012
http://laboratoriogene.info/DXPN/Citomol.jpg
http://www.institutoroche.es/images/glosario/gl30.gif
http://biomodel.uah.es/citogene/horwitz/fishcart.jpg

Mecanismos de Regulación Molecuar y LMA

Bibliografía:

http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S0864-02892002000100002&script=sci_arttext

http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S1727-897X2010000500007&script=sci_arttext

PCR y LMA

Tema: Prevalencia de mutaciones FLT3 en LMA
Objetivo: Analizar la prevalencia de los distintos tipos de mutaciones en el gen FLT3 en pacientes con LMA
Muestra: Muestras de Sangre Periférica  y/o de Médula Ósea
Extracción del ácido nucleico: RNA total celular
Gen Amplia: FLT3
Tipo de PCR: RT-PCR Multiplex
Pasos: por 35 ciclos

Desnaturalización inicial: 5 minutos a 94°C
Desnaturalización: 30 segundos a 95°C

Hibridación: 45 segundos a 56°C

Extensión: 30 segundos a 72°C
Extensión final: 10 minutos a 72°C

Enzima de Restricción: EcoRV (Promega)

Análisis Viral: Electroforesis en gel de Agarosa al 3% y tinción con Bromuro de Etidio

Bibliografía:
http://www.cobico.com.ar/wp-content/archivos/PREVALENCIA-DE-MUTACIONES-FLT3-EN-LMA_Correccion.pdf
http://tododelapcr.files.wordpress.com/2011/11/pcr-lab.jpg
http://www.udg.edu/Portals/86/STR/UBM/img%20PCR/PCR%20-%20Esquema%20de%20PCR%202.gif

Epigenética y LMA

Los mecanismos que protegen a las islas CpG de la metilación son desconocidos, al igual que el estímulo que gatilla la hipermetilación en la LMA y cánceres en general. Uno de los mecanismos podría deberse al reclutamiento de DNMTs en regiones promotoras blanco, mediante la acción de proteínas de fusión. 
Las proteínas de fusión PML-RARα y AML1-ETO actúan por este mecanismo.
Ambas proteínas, además, reclutan HDACs a la región promotora como parte del proceso epigenético de silenciamiento.

La metilación de la isla CpG va a aportar señales de reconocimiento para una serie de componentes que se encuentran en el complejo histona desacetilasa (HDAC) que son los componentes proteína de unión a metil-CpG (MeCP). La HDAC va a actuar provocando la desactivación de ese gen.

Bibliografía:
http://www.sah.org.ar/revista/numeros/vol16-n3-176-184.pdf
http://regeulolo.tripod.com/genmol/

Relación entre Transcripción y LMA

Las semejanzas de las leucemia con reordenamientos MYST3-CREBBP y del gen MLL podrían tener su origen en una célula progenitora del mismo estadio de diferenciación o bien, una coincidencia en el mecanismo de leucemogénesis, en el cual la proteína de fusión aberrante, MYST3-CREBBP o las quimeras de MLL, producirían una activación de la transcripción a través de un mecanismo de ganancia de función, que a su vez llevaría a una inadecuada expresión de determinados genes diana.

Figura 21a: Posibles diferentes mecanismos de represión y activación de la transcripción en las LMA-CBF y LPA
Figua 21b: Las LMA con reodernamiento de MLL-CREBBP y MYST3-CREBBP

Bibliografía:
http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/2220/04.MCG_DISCUSION.pdf?sequence=5

Relación entre Traducción y LMA

La región 5q31-33 del cromosoma 5 contiene genes que codifican proteínas partícipes en la traducción y la regulación transcripcional de señales, especialmente el factor 1 regulador del interferón y el de la respuesta 1 de crecimiento temprano. Esta región incluye genes que codifican para el factor estimulador de crecimiento de colonias hematopoyéticas granulocitomacrófagas (GM-CSF) y las interleucinas IL-3, IL-4, IL-5 e IL-9, factores importantes en la supervivencia y diferenciación de las células hematopoyéticas. La región 7q22 contiene genes involucrados en los mecanismos de reparación del DNA. 
Todo esto hace suponer que la pérdida de alguno de estos genes puede predisponer a la leucemogénesis.

Bibliografía:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S0864-02892002000100002&script=sci_arttext
http://scielo.isciii.es/scielo.php?pid=S0212-71992003000500009&script=sci_arttext#t2

Genes relacionados con AML

La mayoría de los pacientes con AML presentan un cariotipo normal, aunque pueden tener anormalidades citogenéticas en los genes FLT3, NPM1, CEBPA, MLL, RAS, BAALC o EVI1.

FLT3: duplicación en tandem interna en el dominio yuxtamembrana de FLT3, el cual está asociado de forma consistente con una respuesta pobre al tratamiento.

2° dominio de la Tirosina Kinasa: Presentan mutaciones dentro del lazo de activación.

NPM1: gen de la nucleofosmina, somático. Causa localización citoplasmática más que localización nuclear de proteína.

Representación esquemática del gen FLT3 (13q12) y estructura del cDNA de FLT3
 TM: dominio transmembrana. JM: dominio juxtamembrana. TK 1 y 2: dominio tirosina quinasa (TKD). K1: dominio de inserción quinasa.

Bibliografía:

http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S1727-897X2010000500007&script=sci_arttext

¿Cómo Diagnosticar la LMA?

Prueba de Tamizaje: Recuento sanguíneo completo (RSC) 

Prueba de Confirmación: Aspiración de médula ósea y biopsia

RSC

Biopsia de Médula Ósea

Bibliografía:
http://www.mapfre.com/salud/es/cinformativo/leucemia-mieloide-aguda.shtml
http://www.cancer.org/espanol/cancer/leucemiamieloidenaaguda/guiadetallada/leucemia-mieloide-mielogena-aguda-early-diagnosed
http://www.cancer.gov/espanol/pdq/tratamiento/leucemia-mieloide-adultos/Patient
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/esp_presentations/100152_1.htm
http://www.cancer.gov/images/cdr/live/CDR553596-750.jpg

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