PCR y LMA

Tema: Prevalencia de mutaciones FLT3 en LMA
Objetivo: Analizar la prevalencia de los distintos tipos de mutaciones en el gen FLT3 en pacientes con LMA
Muestra: Muestras de Sangre Periférica  y/o de Médula Ósea
Extracción del ácido nucleico: RNA total celular
Gen Amplia: FLT3
Tipo de PCR: RT-PCR Multiplex
Pasos: por 35 ciclos

Desnaturalización inicial: 5 minutos a 94°C
Desnaturalización: 30 segundos a 95°C

Hibridación: 45 segundos a 56°C

Extensión: 30 segundos a 72°C
Extensión final: 10 minutos a 72°C

Enzima de Restricción: EcoRV (Promega)

Análisis Viral: Electroforesis en gel de Agarosa al 3% y tinción con Bromuro de Etidio

Bibliografía:
http://www.cobico.com.ar/wp-content/archivos/PREVALENCIA-DE-MUTACIONES-FLT3-EN-LMA_Correccion.pdf
http://tododelapcr.files.wordpress.com/2011/11/pcr-lab.jpg
http://www.udg.edu/Portals/86/STR/UBM/img%20PCR/PCR%20-%20Esquema%20de%20PCR%202.gif

Epigenética y LMA

Los mecanismos que protegen a las islas CpG de la metilación son desconocidos, al igual que el estímulo que gatilla la hipermetilación en la LMA y cánceres en general. Uno de los mecanismos podría deberse al reclutamiento de DNMTs en regiones promotoras blanco, mediante la acción de proteínas de fusión. 
Las proteínas de fusión PML-RARα y AML1-ETO actúan por este mecanismo.
Ambas proteínas, además, reclutan HDACs a la región promotora como parte del proceso epigenético de silenciamiento.

La metilación de la isla CpG va a aportar señales de reconocimiento para una serie de componentes que se encuentran en el complejo histona desacetilasa (HDAC) que son los componentes proteína de unión a metil-CpG (MeCP). La HDAC va a actuar provocando la desactivación de ese gen.

Bibliografía:
http://www.sah.org.ar/revista/numeros/vol16-n3-176-184.pdf
http://regeulolo.tripod.com/genmol/

Relación entre Transcripción y LMA

Las semejanzas de las leucemia con reordenamientos MYST3-CREBBP y del gen MLL podrían tener su origen en una célula progenitora del mismo estadio de diferenciación o bien, una coincidencia en el mecanismo de leucemogénesis, en el cual la proteína de fusión aberrante, MYST3-CREBBP o las quimeras de MLL, producirían una activación de la transcripción a través de un mecanismo de ganancia de función, que a su vez llevaría a una inadecuada expresión de determinados genes diana.

Figura 21a: Posibles diferentes mecanismos de represión y activación de la transcripción en las LMA-CBF y LPA
Figua 21b: Las LMA con reodernamiento de MLL-CREBBP y MYST3-CREBBP

Bibliografía:
http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/2220/04.MCG_DISCUSION.pdf?sequence=5

Relación entre Traducción y LMA

La región 5q31-33 del cromosoma 5 contiene genes que codifican proteínas partícipes en la traducción y la regulación transcripcional de señales, especialmente el factor 1 regulador del interferón y el de la respuesta 1 de crecimiento temprano. Esta región incluye genes que codifican para el factor estimulador de crecimiento de colonias hematopoyéticas granulocitomacrófagas (GM-CSF) y las interleucinas IL-3, IL-4, IL-5 e IL-9, factores importantes en la supervivencia y diferenciación de las células hematopoyéticas. La región 7q22 contiene genes involucrados en los mecanismos de reparación del DNA. 
Todo esto hace suponer que la pérdida de alguno de estos genes puede predisponer a la leucemogénesis.

Bibliografía:
http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S0864-02892002000100002&script=sci_arttext
http://scielo.isciii.es/scielo.php?pid=S0212-71992003000500009&script=sci_arttext#t2